飼料中的三聚氰胺檢測方法
更新更新時間：2013-04-18
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要：本文采用液相色譜儀對飼料中的三聚氰胺進行檢測，建立了飼料中三聚氰胺的液相色譜法，zui小檢測濃度達0.01mg/kg，回收率＞80%，峰面積的RSD為0.275% ，有良好的線性關系（r=1.00000），具有快速、準確、等特點。
三聚氰胺，簡稱三胺，分子式C3N6H6，是一種重要的氮雜環有機化工原料。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素，而普通的全氮測定法測飼料和食品中的蛋白質含量時不能排除這類偽蛋白氮的干擾，因而一些廠商為了能降低成本而添加這種化工原料，以提高產品中蛋白質含量。《化學品安全手冊》第三卷和化學品安全卡片說明：長期或反復大量攝入三聚氰胺可能對腎與膀胱產生影響，導致產生結石。奶粉中相繼查出含大量的三聚氰胺，不由讓我們對飼料中是否含有三聚氰胺，產生質疑。本文采用浙江福立分析儀器有限公司生產的FL2200液相色譜儀建立飼料中三聚氰胺快速、準確的檢測方法。
1、 材料和方法
1.1 主要儀器和試劑
液相色譜儀；
高速離心機（10000r/min）；
超聲波震蕩儀；
渦旋混合器；
分析天平（萬分之一）；
溶劑過濾器（帶0.45um有機、水系過濾膜和真空泵）；
乙腈（HPLC級）；
三聚氰胺（≥99.0%）；
檸檬酸（分析純）；
辛烷磺酸鈉（色譜級）；
三錄乙酸（優級純）；
乙酸鉛（優級純）；
水（二次蒸餾水以上）；
稀釋液:50%甲醇水溶液；
1.2 色譜條件：
色譜柱 Venusil ASB C8 4.6*250mm 5um
流動相 乙腈：10mM/L檸檬酸+10mM/L辛烷磺酸鈉緩沖液=10：90（pH=3.0）
檢測波長 240nm
柱溫 40℃
流速 1ml/min
進樣量 20uL
2、實驗部分
2.1三聚氰胺標準儲備液和標準溶液的配制
準確稱取三聚氰胺標樣100.0mg ，放于25ml燒杯中，加稀釋液20ml超聲波溶解1分鐘，然后轉移到100ml的容量瓶中，用稀釋液清洗燒杯5次，每次10ml，然后把清洗后的稀釋液全部轉移到100ml容量瓶中，用稀釋液定容100ml，即得濃度為1000mg/L三聚氰胺標樣溶液。
準確量取濃度為1000mg/L三聚氰胺標樣溶液50ml，用流動相定容至500ml，即得濃度為100mg/L的三聚氰胺標準溶液。
分別準確量取濃度為100mg/L的三聚氰胺標準溶液0.8ml、2ml、20ml、40ml、80ml、放于100ml的容量瓶中，用流動相定容100ml，得濃度為0.8mg/L、2mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L的標準溶液，過0.45um的有機過濾頭過濾，保存待測。
2.1.1 重復性測定
取濃度為80.0mg/L的標準溶液，重復進樣3次，測定結果見表1，色譜圖見圖1。
2.1.2 線性試驗
取濃度為0.8mg/L、2mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、50mg/L的標準品分別作樣，繪制濃度-峰面積的曲線。實驗表明：三聚氰胺在0.8-80.0mg/L間，有良好的線性，見圖2。
可得：W=-0.037868+0.000011*A；R2=1.00000
2.1.3 三聚氰胺zui小檢測濃度
在上述試驗條件下，以3S/N為zui小檢測濃度，三聚氰胺的zui小檢測濃度為0.01mg/kg
2.2空白實驗
稱取5.00g純凈水于100ml錐形瓶中，加入50ml三錄乙酸溶液（1%）和2ml乙酸鉛溶液（22g/L），搖勻，超聲提取20min。靜置2min，取上層清液30ml，10000r/min離心10min。取上清液10ml做待凈化液。
（以下流速控制＜1.00ml/min）
搭好固相萃取裝置，接上混合型陽離子交換固相萃取柱，向小柱中加入3ml甲醇，抽至近干，加入3ml水活化，抽至近干，將凈化液緩慢轉移至固相萃取柱，抽至近干，加3ml水洗滌，抽至近干，加3ml甲醇洗滌，抽至近干，換成收集管，加入6ml氨化甲醇溶液洗脫，把收集的收集液于55℃下氮氣吹干，殘留物加2ml流動相溶解，渦旋混合2min，超聲波2min，0.45um過濾頭過濾。
在上述色譜條件下進樣，結果未出峰。
2.3 樣品前處理與測定
隨機抽取市面上的飼料，進行處理分析。
稱取5.00g試樣于100ml錐形瓶中，加入50ml三錄乙酸溶液（1%）和2ml乙酸鉛溶液（22g/L），搖勻，超聲提取20min。靜置2min，取上層清液30ml，10000r/min離心10min。取上清液10ml做待凈化液。
（以下流速控制＜1.00ml/min）
搭好固相萃取裝置，接上混合型陽離子交換固相萃取柱，向小柱中加入3ml甲醇，抽至近干，加入3ml水活化，抽至近干，將凈化液緩慢轉移至固相萃取柱，抽至近干，加3ml水洗滌，抽至近干，加3ml甲醇洗滌，抽至近干，換成收集管，加入6ml氨化甲醇溶液洗脫，把收集的收集液于55℃下氮氣吹干，殘留物加2ml流動相溶解，渦旋混合2min，超聲波2min，0.45um過濾頭過濾。
2.4 回收率實驗
稱取5.00g試樣于100ml錐形瓶中，分別加入濃度為2mg/L三聚氰胺標準溶液1ml、2ml、3ml；分別加入濃度為20mg/L三聚氰胺標準溶液1ml、2ml、3ml；分別加入濃度為40mg/L三聚氰胺標準溶液1ml、2ml、3ml，然后依次加入49、48、47ml三錄乙酸溶液（1%）和2ml乙酸鉛溶液（22g/L），搖勻，超聲提取20min。靜置2min，取上層清液30ml，10000r/min離心10min。取上清液10ml做待凈化液。
（以下流速控制＜1.00ml/min）
搭好固相萃取裝置，接上混合型陽離子交換固相萃取柱，向小柱中加入3ml甲醇，抽至近干，加入3ml水活化，抽至近干，將凈化液緩慢轉移至固相萃取柱，抽至近干，加3ml水洗滌，抽至近干，加3ml甲醇洗滌，抽至近干，換成收集管，加入6ml氨化甲醇溶液洗脫，把收集的收集液于55℃下氮氣吹干，殘留物加2ml流動相溶解，渦旋混合2min，超聲波2min，0.45um過濾頭過濾。
3、 結論
試驗證明：采用液相色譜儀測定飼料中的三聚氰胺，具有檢測靈敏度高、精密度高、準確度高、線性范圍好和回收率高等優點，*符合分析要求，適合各類飼料中三聚氰胺的快速檢。（色譜儀器網）
